State Bike Route 25 begynder ved krydset mellem NY Route 25, NY Route 25A og NY Route 111, en halv mil øst for Smithtowns centrale forretningsdistrikt, og fortsætter nordøst langs NY Route 25A, hvorefter den afviger til lokale veje i St James, Stony Brook og Setauket, og genforenes kort med NY Route 25A i Setauket. I den maleriske landsby Port Jefferson forbinder NY State Bike Route 25 med færgen Port Jefferson-Bridgeport, CT. NY Route 25 State Bike Route 25 fortsætter mod øst fra Port Jefferson og følger lokale veje i seks miles, før den genforenes med NY Route 25A i Sound Beach. Gående øst fra Sound Beach forbliver NY 25 State Bike Route på NY Route 25A og følger en designet cykelbane, indtil den går sammen med NY 25 i Calverton. NY 25 State Bike Route forbliver på NY Route 25 det meste af vejen ud til Orient Point undtagen for en sektion på lokale veje i Riverhead Town og Greenport Village.